细胞接种/铺板计算传代稀释比 (Split Ratio)血球计数板浓度换算
细胞铺板计算器与细胞传代稀释比 (Split Ratio)
快速计算 96 孔板、6 孔板、培养皿及培养瓶的细胞接种量、细胞悬液取样体积、完全培养基补足量与传代分装比例。
细胞铺板与接种计算
根据孔板规格、所需密度和细胞原液浓度，自动计算 Master Mix 稀释体系与加样量
支持科学计数法，如 1.5e6 或 1500000
默认 10%；按器材损耗调整，范围 0–50%。
铺板 Master Mix 配制方案
88 µL 原液+1.232 mL 培养基=1.32 mL
单孔/单皿接种量:1.00 × 10⁴ cells
所需细胞总数 (+10%):1.32 × 10⁵ cells
混匀总液体积:1.32 mL
实验操作步骤摘要
1
需补加的新鲜培养基体积:
1.232 mL
2
需吸取的细胞原液体积:
88 µL
3
混匀后向每个孔/皿分装 0.1 mL，放入培养箱。
充分混匀的预混液有助于提高孔间一致性；仍需控制细胞沉降、移液误差和蒸发。
核心计算公式与推导
1. 所需细胞总数 (带损耗余量)
所需细胞数 = 孔数 × 单孔细胞数 × (1 + 余量% / 100)
2. 需吸取的细胞悬液体积
原液体积 (mL) = 所需细胞数 ÷ 原液浓度 (cells/mL)
3. 需补加的新鲜完全培养基
补加培养基体积 = 最终混合液体积 − 原液体积
4. 血球计数板浓度公式
cells/mL = (活细胞总数 ÷ 计数大格数) × 10⁴ × 稀释倍数
常见器皿面积与工作体积示例
面积与体积随厂商而异，细胞数仅作计算示例，不是所有细胞系的接种建议。请使用器皿规格和细胞系已验证方案。
| 培养器皿规格 | 生长底面积 (cm²) | 示例工作体积 | 示例细胞数 |
|---|---|---|---|
| 96-well plate | 0.32 cm² | 0.1 – 0.2 mL | 0.5 – 2 × 10⁴ cells |
| 48-well plate | 0.95 cm² | 0.25 – 0.5 mL | 2 – 5 × 10⁴ cells |
| 24-well plate | 1.9 cm² | 0.5 – 1.0 mL | 0.5 – 1 × 10⁵ cells |
| 12-well plate | 3.8 cm² | 1.0 – 2.0 mL | 1 – 2 × 10⁵ cells |
| 6-well plate | 9.5 cm² | 2.0 – 3.0 mL | 2.5 – 5 × 10⁵ cells |
| 35 mm dish | 8.8 cm² | 2.0 mL | 2 – 4 × 10⁵ cells |
| 60 mm dish | 21.0 cm² | 4.0 – 5.0 mL | 0.5 – 1 × 10⁶ cells |
| 100 mm dish | 55.0 cm² | 10.0 – 12.0 mL | 1.5 – 3 × 10⁶ cells |
| 150 mm dish | 148.0 cm² | 20.0 – 30.0 mL | 4 – 8 × 10⁶ cells |
| T-25 flask | 25.0 cm² | 5.0 – 7.0 mL | 0.5 – 1 × 10⁶ cells |
| T-75 flask | 75.0 cm² | 15.0 – 20.0 mL | 1.5 – 3 × 10⁶ cells |
| T-175 flask | 175.0 cm² | 30.0 – 35.0 mL | 3 – 6 × 10⁶ cells |
| T-225 flask | 225.0 cm² | 40.0 – 50.0 mL | 4 – 8 × 10⁶ cells |
分装前检查
1保持细胞悬液均匀
细胞在分装过程中可能沉降。根据细胞系要求轻柔混匀，避免气泡。预混液有助于提高一致性，但不能消除移液误差。
2控制蒸发
边缘孔可能受蒸发影响。采用经过验证的布板和湿度控制方案；部分实验可预留外围孔，但预混液本身不能避免边缘效应。
3检查分布
按细胞系方案混匀和移动培养板，并检查实际分布；固定晃动次数不能保证均匀接种。
4按器材设置余量
默认 10% 只是配液余量。根据储液槽和移液器的实际损耗调整，小批量配液可能需要不同数值。