引物复溶定容与稀释计算器
计算冻干引物复溶至 100 µM 母液所需加入的水或 TE Buffer 体积，一键生成 10 µM PCR 工作液稀释配方，并快速检测引物分子量与退火温度。
冻干引物参数输入
请查看合成引物管壁标签（如 32.4 nmol）
需加入的溶液体积
如何使用引物复溶计算器
- 在管身或质检报告上找到实际交付量（nmol），不要使用下单时的合成规模。
- 选择母液浓度。100 µM 是常见起点，并非所有实验的固定要求。
- 读取溶剂体积，选择适用的缓冲液或无核酸酶水，并遵循供应商的复溶说明。
- 切换到工作液稀释，配制较低浓度溶液。每条引物分别计算，并核对反应中的终浓度。
科学计算原理与公式
复溶体积 V（µL）由实际交付量 n（nmol）和目标浓度 C（µM）决定：
由于 1 µM = 1 pmol/µL = 0.001 nmol/µL，配制 100 µM 溶液即为 0.1 nmol/µL，故所需体积直接为 nmol × 10。
连续算例：从冻干引物到 PCR 加样
跟随同一条引物完成复溶、工作液稀释和反应加样。以下仅为计算示例，实际浓度以实验方案为准。
1. 用 32.4 nmol 配制 100 µM 母液
管中有 32.4 nmol 冻干引物。用实际量除以目标浓度，并完成 nmol 与 pmol 的换算。
V = 32.4 × 1000 / 100 = 324 µL
向冻干引物中加入 324 µL 适用溶剂，得到 100 µM 母液。
2. 配制 100 µL、10 µM 工作液
使用示例 1 中的 100 µM 母液。100 µL 指混匀后的总体积，不是加水量。
V₁ = C₂V₂ / C₁ = 10 × 100 / 100 = 10 µL
混合 10 µL 母液和 90 µL 稀释液。这是十倍稀释，即一份母液加九份稀释液。
3. 计算 20 µL 反应中的引物加样量
使用示例 2 的 10 µM 工作液，使其中一条引物在反应中的终浓度达到 0.5 µM。
V₁ = 0.5 × 20 / 10 = 1 µL
加入该引物 1 µL。如果正反向引物均需达到这个终浓度，则各加 1 µL，且两者体积都计入 20 µL 反应总体积。
引物复溶体积速查表
| 实际交付量（nmol） | 20 µM | 50 µM | 100 µM |
|---|---|---|---|
| 5 | 250 µL | 100 µL | 50 µL |
| 10 | 500 µL | 200 µL | 100 µL |
| 25 | 1250 µL | 500 µL | 250 µL |
| 50 | 2500 µL | 1000 µL | 500 µL |
| 100 | 5000 µL | 2000 µL | 1000 µL |
单位说明与常见错误
- 物质的量与浓度不同：nmol 表示引物有多少；µM 表示单位体积内有多少。1 µM = 1 pmol/µL，因此 100 µM = 100 pmol/µL。
- 母液浓度、工作液浓度和反应终浓度是不同概念。向 PCR 体系加入少量 10 µM 工作液，不会使整个反应达到 10 µM。
- 稀释液体积 = 最终体积 − 母液体积。不要在母液之外再加入等于最终体积的水。
- 当移液量低于移液器可靠范围时，应配制中间稀释液或增大配制体积。稀释无法得到高于母液的浓度。
TE 缓冲液 (pH 8.0) — 推荐用于母液保存
无菌去离子水 — 推荐用于 10 µM PCR 工作液
序列计算的方法与适用范围
序列属性仅支持按 5′ → 3′ 输入的未修饰单链 DNA（A、C、G、T）。允许空格和换行；不支持 RNA、简并碱基、FASTA 标题或修饰标记。分子量假设为未修饰、羟基末端的 DNA；修饰引物应使用供应商提供的分子量。
Wallace Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C)，仅按碱基组成粗略估算，不考虑盐、Mg²⁺、引物浓度、错配或二级结构，不能单独作为退火温度的依据。
常见问题解答 (FAQ)
为什么开盖复溶前必须先离心？
开盖前短暂离心，将管盖和管壁上的物料收集到管底。具体离心和混匀条件应遵循供应商说明。
PCR 反应体系中常用的引物浓度是多少？
常规 PCR 体系中引物的最终工作浓度一般为 0.2 µM 至 0.5 µM。将引物配制成 10 µM 工作液，在 20–50 µL 反应中加入 1 µL 即可精确移液。
复溶后的引物应该如何妥善保存？
对于普通 DNA 寡核苷酸，IDT 建议长期置于 −20°C 保存，包括溶于适用 TE 缓冲液或无核酸酶水的情况。修饰引物遵循供应商说明；分装有助于减少反复操作和污染。
如果管子上只标明了 OD260，该如何换算？
优先使用供应商标注的实际 nmol。如果只有 OD260，应使用供应商提供的序列特异性消光系数换算；也可根据质量和分子量计算。通用 OD–质量系数对短引物仅是近似值，本计算器接收 nmol 而非原始吸光度。
相关计算器
使用以下 CodonTable 站内工具，继续计算稀释用量或配制缓冲液。