CodonTableCodonTable
实验优化与连续移液
ELISA • 微生物CFU • qPCR • IC50
DF = 总体积 / 转移体积

系列稀释计算器 (多梯度稀释与移液体积)

设计几何级数连续稀释体系，适用于 ELISA 标准曲线、微生物菌落计数 (CFU)、qPCR 动态范围及 IC50 剂量反应检测。直观展示孔板渐变及可复制的移液操作规程。

系列稀释设置

Quick 预设:

浓度 of 管 1 (undiluted 储液)

Fold 稀释 per 步骤 (e.g. 2 = 1:2, 10 = 1:10)

总计 管 or microplate 孔

目标 最终 体积 in each 孔

转移体积100 µL

Pipetted per 步骤

稀释液体积100 µL

Pre-loaded in 管 2–8

总计 Dynamic 范围1 : 128

Across 8 稀释 levels

Lowest 浓度7.81 µg/mL

管 8

稀释系列预览

#1
100 µL
1000.0
µg/mL
1:1
+100 µL
#2
100 µL
500.0
µg/mL
1 : 2
+100 µL
#3
100 µL
250.0
µg/mL
1 : 4
+100 µL
#4
100 µL
125.0
µg/mL
1 : 8
+100 µL
#5
100 µL
62.50
µg/mL
1 : 16
+100 µL
#6
100 µL
31.25
µg/mL
1 : 32
+100 µL
#7
100 µL
15.63
µg/mL
1 : 64
+100 µL
#8
200 µL
7.81
µg/mL
1 : 128

系列稀释加样量与浓度表

管 #稀释 Ratio稀释 Fold浓度Log₁₀[C]转移 Vol稀释液 Vol最终 Remaining Vol
管 1 (储液)1:11.0x1000.0 µg/mL3.00--100 µL
管 2 1 : 22.0x500.0 µg/mL2.70100 µL100 µL100 µL
管 3 1 : 44.0x250.0 µg/mL2.40100 µL100 µL100 µL
管 4 1 : 88.0x125.0 µg/mL2.10100 µL100 µL100 µL
管 5 1 : 1616.0x62.50 µg/mL1.80100 µL100 µL100 µL
管 6 1 : 3232.0x31.25 µg/mL1.49100 µL100 µL100 µL
管 7 1 : 6464.0x15.63 µg/mL1.19100 µL100 µL100 µL
管 8 1 : 128128.0x7.81 µg/mL0.89100 µL100 µL200 µL

系列稀释计算器数学公式与稀释比计算

1. 单步稀释倍数 (DF) 计算公式

每个转移步骤的单步稀释倍数等于管内最终总体积与转移样品体积之比：

稀释倍数 (DF)=V_totalV_transfer=
V_transfer+V_diluent
V_transfer

例如：将 50 µL 母液加入 150 µL 稀释液中，总容积为 200 µL，即实现了 4 倍稀释（DF = 200 / 50 = 4，对应 1:4 稀释比例）。

2. 累积稀释倍数与终浓度计算

在包含 n 步、恒定稀释倍数 DF 的等比梯度稀释体系中：

Cn=C0
DFn
=C0×(1DF)n

3. 稀释比例术语：1:N 的含义规范

在生物医药及生物化学文献中，“1:10 稀释”国际标准指 1 份样品加入 9 份稀释液，配成总计 10 份总体积（即 10 倍稀释）。实验操作前务必核对方案是“样品/总体积”还是“样品/稀释液”，避免产生 10%–20% 的系统性浓度偏差。

连续梯度稀释实验流程图解与弃液规范

标准 1:10 连续稀释管路转移示意图 (例如 100 µL 转移 + 900 µL 稀释液)
实验操作流程
Stock10⁰ (100%)+100 µLTube 110⁻¹ (1:10)+100 µLTube 210⁻² (1:100)+100 µLTube 310⁻³ (1:1k)+100 µLTube 410⁻⁴ (1:10k)Discard 100 µLWaste每管最终保持相等工作体积 (如 900 µL)，便于下步酶标仪检测或平板涂布计数
1. 预分装稀释液

预先向所有目标管加入 900 µL 无菌水/PBS

2. 递进转移并换头

每步移取 100 µL，吹打 5-8 次并更换新枪头

3. 末管弃液平衡

从最后一管弃去 100 µL，保持各管总体积恒定

系列稀释标准实验操作与移液质控指南

每步转移务必更换移液枪头

切勿重复使用同一枪头进行连续多步转移。残留在枪头外壁的高浓度液体附着带入下一管，会导致 8 步稀释后累积产生 15%–40% 的严重正向浓度偏差。

吹打混匀充分性（5–8 次）

将移液器量程调至该孔总体积的 75% 左右，充分吹打吸放 5 至 8 次，确保混合均匀后再吸取进行下一步转移。避免吹打产生气泡或气溶胶。

末管弃液以保持各孔体积一致

若下游酶标仪读数或细胞检测实验要求每个孔的总体积完全一致（如 96 孔板均为 100 µL），需将最后一管吸出的转移液体废弃，以保持所有孔体积恒定。

核心实验应用场景

ELISA 与免疫分析（2 倍或 3 倍梯度稀释）

标准曲线通常包含 7 至 8 个浓度点（如 1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, 0 pg/mL），确保覆盖四参数逻辑回归 (4PL) 的完整线性及饱和检测动态范围。

微生物 CFU 涂板菌落计数（10 倍梯度稀释）

通过从 10⁻¹ 至 10⁻⁷ 进行 10 倍逐级稀释涂板，使平板菌落数落在统计学最准确的 30 至 300 CFU 理想计数区间。

药理学 IC50 / 剂量反应曲线（半对数 Half-Log 稀释）

半对数稀释倍数为 √10 ≈ 3.162（如 10 µM, 3.16 µM, 1 µM, 316 nM, 100 nM...），在对数坐标轴上呈现等间距分布，是拟合 S 型 Hill 剂量反应曲线的最优方案。

常见问题解答

生物实验协议中的“1:10 稀释”通常是什么含义？

在生物学与生物化学中，“1:10 稀释”标准含义为 1 份母液加入 9 份稀释液，最终得到 10 份总体积（即 10 倍稀释，稀释因子为 10）。实验前务必核对协议指的是“部分对整体 (1:10)”还是“部分对比部分”。

连续稀释每步转移时为什么必须更换移液枪头？

移液吸头外壁附着的高浓度液体残留会带入后续稀释孔中。若不更换吸头，经 8 步连续转移后，末端浓度正偏差可累积高达 15% 至 40%。

药理学和药物筛选中的半对数稀释 (Half-Log) 是如何计算的？

半对数稀释采用 √10 ≈ 3.162 的稀释倍数。连续稀释两步正好降低 10 倍（1 个数量级）。这能在对数坐标轴上产生均匀等距的浓度点，极其契合 Hill 方程剂量效应曲线拟合。

梯度稀释最后一个孔或管中的液体需要弃去一部分吗？

如果后续检测要求各孔体积严格一致（如 96 孔板 ELISA 或细胞活力检测要求每孔 100 µL），则需要在最后一步转移混匀后吸弃转移体积，以确保所有检测孔液体体积均等。

分享此页面

推荐工具

Solution Dilution Calculator

Chemistry

Calculate dilution volumes using C1V1 = C2V2 (stock volume, diluent volume, dilution factor)

Buffer Calculator

Chemistry

Prepare phosphate, Tris, acetate, citrate, carbonate, PBS, TBS, and Good’s buffers by pH, concentration, and volume

Molarity Calculator (Mass & Concentration)

Chemistry

Calculate mass of solid solute, molar concentration (M, mM, µM), and solution volume for lab buffer and chemical preparation

Explore All Lab Calculators →