タンパク質濃度計算機｜BCA・Bradford・A280
BCA・Bradfordでは隣接する実測標準点間の補間で濃度を推定し、線形フィットの診断値を別に表示します。A280による直接測定にも対応します。
標準曲線の解析
| # | 標準液濃度（µg/mL） | 吸光度（OD） | 操作 |
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未知タンパク質サンプルの測定値
標準曲線の結果
サンプル濃度は隣接する実測標準点間の区分線形補間で計算します。R²は別途求めた線形フィットの指標です。
測定方法と濃度計算
タンパク質濃度の正確な定量は、分子生物学、抗体評価、酵素反応解析、ウェスタンブロットの基盤です。実験室で汎用される3つの主要な測定法の原理は以下の通りです：
BCA法 (562 nm)
アルカリ性条件下でペプチド結合およびCys、Tyr、Trp残基がCu²⁺をCu⁺に還元し、BCAとキレートして紫色錯体を形成。最大5%のSDSやTriton等の界面活性剤と共存可能です。
Bradford法 (595 nm)
クマシーブリリアントブルーG-250が塩基性（主にアルギニン）および芳香族残基に結合し、極大吸収が465 nmから595 nmへシフト。DTT等の還元剤と共存可能ですが界面活性剤には敏感です。
直接吸光 A280
TrpおよびTyr残基の280 nmにおける固有の紫外吸光に基づく直接定量（ランベルト・ベールの法則）。迅速・非破壊ですが、核酸（A260）の混入に影響されます。
測定条件の確認
| 干渉試薬 | BCA法 | Bradford法 | 直接吸光 A280 |
|---|---|---|---|
| 界面活性剤 (SDS, Triton X-100, NP-40) | 適合 (最大 5%) | 不適合 (> 0.1% 沈殿) | 適合 |
| 還元剤 (DTT, β-ME, TCEP) | 不適合 (Cu²⁺を直接還元) | 適合 (最大 5 mM DTT) | 適合 (ブランク補正要) |
| 核酸 (DNA / RNA) | 干渉なし | 軽微な干渉 | 強い干渉 (A260/A280比で補正) |
計算例
計算例：細胞溶解液のBCA濃度定量とウェスタンブロットアプライ量算出
RIPA細胞溶解液を1:5に希釈（DF = 5）。562 nmでの吸光度 A₅₆₂ = 0.485。近接するBSA標準点は500 µg/mL（A = 0.412）と750 µg/mL（A = 0.578）です。
- 1. 実測吸光度を挟む標準点: 0.412 < 0.485 < 0.578
- 2. 希釈後濃度（隣接点間の線形補間）: 500 + ((0.485 − 0.412) / (0.578 − 0.412)) × 250 = 609.9 µg/mL
- 3. 原液濃度: 609.9 µg/mL × 5 (DF) = 3049.7 µg/mL ≈ 3.05 mg/mL
- 4. WBアプライ量: 各レーンに30 µgをアプライする場合、30 / 3.05 ≈ 9.84 µLを分注します。
よくある質問
どの方法でタンパク質濃度を計算できますか？
ページで選択できるBCA、Bradford、またはA280の入力方法を使って計算します。
標準曲線のR²はどのように解釈しますか？
R²は線形フィットの診断値であり、曲線や測定範囲の適切さを単独で保証するものではありません。試薬の手順、残差、反復間のばらつき、測定範囲も確認してください。この計算機は隣接する実測標準点間の補間で試料濃度を推定し、表示する線形フィットとは分けて計算します。
A280による計算には何が必要ですか？
A280吸光度と、計算画面で指定する消光係数などの条件を入力します。
標準曲線の結果はどう確認しますか？
入力した標準データと当てはめ結果を確認し、未知試料の測定値が標準データの範囲から大きく外れていないか確認してください。