段階希釈計算機｜連続希釈の調製量
目標濃度や希釈倍率、段数、各段階の液量を入力して、段階ごとの調製量を計算します。
段階希釈の設定
チューブ1の濃度（未希釈原液）
1段階あたりの希釈倍率（例：2 = 1:2、10 = 1:10）
チューブまたはマイクロプレートのウェル数
目的 最終 容量 in each ウェル
1段階あたりの分注量
チューブ2〜8
合計8段階
チューブ 8
希釈系列のプレビュー
段階希釈の分注量・濃度表
| チューブ # | 希釈比 | 希釈倍率 | 濃度 | log₁₀[C] | 移送量 | 希釈液量 | 最終残量 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| チューブ 1 (原液) | 1:1 | 1.0x | 1000.0 µg/mL | 3.00 | - | - | 100 µL |
| チューブ 2 | 1 : 2 | 2.0x | 500.0 µg/mL | 2.70 | 100 µL | 100 µL | 100 µL |
| チューブ 3 | 1 : 4 | 4.0x | 250.0 µg/mL | 2.40 | 100 µL | 100 µL | 100 µL |
| チューブ 4 | 1 : 8 | 8.0x | 125.0 µg/mL | 2.10 | 100 µL | 100 µL | 100 µL |
| チューブ 5 | 1 : 16 | 16.0x | 62.50 µg/mL | 1.80 | 100 µL | 100 µL | 100 µL |
| チューブ 6 | 1 : 32 | 32.0x | 31.25 µg/mL | 1.49 | 100 µL | 100 µL | 100 µL |
| チューブ 7 | 1 : 64 | 64.0x | 15.63 µg/mL | 1.19 | 100 µL | 100 µL | 100 µL |
| チューブ 8 | 1 : 128 | 128.0x | 7.81 µg/mL | 0.89 | 100 µL | 100 µL | 200 µL |
段階希釈の計算方法
1. 各ステップの希釈倍率 (DF) 計算式
各移送ステップにおける希釈倍率は、管内の最終全体積と移送したサンプル体積の比率として定義されます：
例：50 µLの原液を150 µLの希釈液に加えると全量200 µLとなり、4倍希釈（DF = 200 / 50 = 4、1:4希釈比）となります。
2. 累積希釈倍率と最終濃度の算出
一定の希釈倍率 DF で n ステップ連続希釈を行った場合の計算式：
3. 希釈表記の定義：1:N の国際ルール
生物化学分野では、「1:10 希釈」は通常 1 容のサンプルに 9 容の希釈液を加え、合計 10 容とする（10倍希釈）ことを意味します。プロトコルが「全量比」か「混合比」かを常に確認し、10〜20%の系統誤差を防ぎましょう。
段階希釈のピペッティング手順と廃棄ボリュームの図解
全チューブに900 µLのバッファーを分注
100 µL移送後、5〜8回撹拌しチップを交換
最後のチューブから100 µLを廃棄し等量に保つ
入力値と各段階の液量
移送ごとに必ずチップを交換する
連続した希釈ステップで同じピペットチップを再利用しないでください。チップ外壁に付着した高濃度サンプルの持ち越しにより、8段階希釈で15%〜40%の累積正誤差が生じます。
入念なピペッティング撹拌（5〜8回）
ピペット容量をウェルの全液量の約75%に設定し、次のウェルへ移送する前に5〜8回ピペッティングして均一に混和します。気泡やエアロゾルの発生を避けてください。
液量を揃えるための最終管からの液量廃棄
後続のプレートリーダー測定や細胞アッセイで全ウェルの液量を均一にする必要がある場合（96ウェルで各100 µL等）、最終チューブから吸い出した液量を廃棄します。
段階希釈を使う場面
ELISA・免疫測定（2倍または3倍段階希釈）
検量線は通常7〜8点（例：1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, 0 pg/mL）で作成され、4PLロジスティック回帰の直線域とプラトー域を網羅します。
微生物コロニー形成単位 (CFU) 測定（10倍希釈）
10⁻¹から10⁻⁷までの10倍段階希釈を行い寒天培地に塗沫することで、統計的に信頼できる30〜300 CFUの適正コロニー数を得ます。
薬理学 IC50・用量反応曲線（半対数 Half-Log 希釈）
半対数希釈（√10 ≒ 3.162倍、例：10 µM, 3.16 µM, 1 µM, 316 nM, 100 nM...）は対数目盛上で均等に配置され、シグモイドHill曲線のフィッティングに最適です。
よくある質問
段階希釈の計算には何を入力しますか？
目標の希釈倍率や濃度、希釈段数、各段階の移送量または最終量など、画面の入力項目を指定します。
各段階の濃度はどのように求められますか？
各段階で設定した移送量と全量から希釈倍率を求め、前段階の濃度に順次適用します。
連続希釈と段階希釈は同じ意味ですか？
このツールでは、試料を複数段階に分けて希釈する手順を段階希釈として扱います。
表示された液量を変更できますか？
入力値を変更すると計算結果も更新されます。実際の調製では使用する容器とピペットの容量を確認してください。