細胞播種・プレート分注計算継代比（1:X）血球計算盤ヘルパー
細胞播種・継代比計算機
96ウェルプレート、6ウェルプレート、培養ディッシュ、Tフラスコの播種必要細胞数、細胞懸濁液量、完全培地補填量、継代スプリット比を素早く算出。
細胞播種・プレーティング
容器形式、目標細胞数、細胞懸濁液濃度から、播種に必要な液量と培地量を計算します。
例：1.5e6 または 1500000
初期値は10%。器具に合わせて0〜50%で調整してください。
播種用マスターミックスの配合
88 µL 細胞懸濁液+1.232 mL 培地=1.32 mL
ウェル・容器あたりの細胞数:1.00 × 10⁴ cells
必要な細胞総数 (+10%):1.32 × 10⁵ cells
マスターミックス総量:1.32 mL
調製手順
1
加える新鮮培地量:
1.232 mL
2
加える細胞懸濁液量:
88 µL
3
静かに混和し、12個のウェル・容器にそれぞれ0.1 mLずつ分注します。
播種液を均一に混和するとウェル間のばらつきを抑えやすくなります。細胞の沈降、分注誤差、蒸発にも注意してください。
基本計算式と導出
1. 必要細胞総数 (余量含む)
必要細胞総数 = ウェル数 × ウェルあたり細胞数 × (1 + 余量% / 100)
2. 細胞懸濁原液の必要分注量
原液量 (mL) = 必要細胞総数 ÷ 原液濃度 (cells/mL)
3. 追加新鮮完全培地量
追加培地量 = 最終調製量 − 原液量
4. 血球計算盤の濃度換算式
cells/mL = (生細胞数 ÷ 大区画数) × 10⁴ × 希釈倍率
培養容器の面積と液量の例
面積と液量はメーカーにより異なります。細胞数は計算例であり、全細胞系への推奨値ではありません。容器規格と細胞系のプロトコルをご確認ください。
| 培養容器規格 | 培養底面積 (cm²) | 標準液量 | 細胞数の計算例 |
|---|---|---|---|
| 96ウェルプレート | 0.32 cm² | 0.1 – 0.2 mL | 0.5 – 2 × 10⁴ cells |
| 48ウェルプレート | 0.95 cm² | 0.25 – 0.5 mL | 2 – 5 × 10⁴ cells |
| 24ウェルプレート | 1.9 cm² | 0.5 – 1.0 mL | 0.5 – 1 × 10⁵ cells |
| 12ウェルプレート | 3.8 cm² | 1.0 – 2.0 mL | 1 – 2 × 10⁵ cells |
| 6ウェルプレート | 9.5 cm² | 2.0 – 3.0 mL | 2.5 – 5 × 10⁵ cells |
| 35 mmディッシュ | 8.8 cm² | 2.0 mL | 2 – 4 × 10⁵ cells |
| 60 mmディッシュ | 21.0 cm² | 4.0 – 5.0 mL | 0.5 – 1 × 10⁶ cells |
| 100 mmディッシュ | 55.0 cm² | 10.0 – 12.0 mL | 1.5 – 3 × 10⁶ cells |
| 150 mmディッシュ | 148.0 cm² | 20.0 – 30.0 mL | 4 – 8 × 10⁶ cells |
| T-25フラスコ | 25.0 cm² | 5.0 – 7.0 mL | 0.5 – 1 × 10⁶ cells |
| T-75フラスコ | 75.0 cm² | 15.0 – 20.0 mL | 1.5 – 3 × 10⁶ cells |
| T-175フラスコ | 175.0 cm² | 30.0 – 35.0 mL | 3 – 6 × 10⁶ cells |
| T-225フラスコ | 225.0 cm² | 40.0 – 50.0 mL | 4 – 8 × 10⁶ cells |
分注前の注意点
1懸濁液を均一に保つ
分注中に細胞が沈降することがあります。気泡を立てずに穏やかに再懸濁してください。マスターミックスは再現性を高めますがピペッティング誤差をゼロにはできません。
2蒸発（エッジ効果）の制御
外周ウェルは蒸発の影響を受けやすいです。検証済みの配置プロトコルに従い、必要に応じて外周ウェルをPBS等で満たしてください。
3細胞分布の確認
プロトコルに従って混和・静置し、顕微鏡で実際の細胞分布を確認してください。単純な十字揺らしだけでは均一性が保証されない場合があります。
4適切な余量設定
デフォルトの10%は目安です。リザーバーやピペットチップのデッドボリュームに応じて調整してください。小容量の場合は多めの余量が必要です。